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2002-06-24
Actualité médicale

Tags: strategie -  detection -  interactions -  proteine-proteine -  in vivo -  vitro - 
Une nouvelle stratégie de détection d'interactions protéine-protéine in vivo et in vitro
 - Actualité médicale
Une nouvelle stratégie de détection d'interactions protéine-protéine in vivo et in vitro

L'équipe du professeur Michnick qui avait déjà publié un article décrivant sa stratégie de détection des interactions protéine-protéine, basée sur la complémentarité de fragments protéique -Protein Fragment complementation assay, PCA- ( voir BE 180) vient de co-signer un autre article dans Nature Biotechnologie. Cette fois ci, le professeur Michnick et ses collaborateurs décrivent leur nouvelle stratégie utilisant l'enzyme TEM-1 B-lactamase.

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L'équipe du professeur Michnick qui avait déjà publié un article décrivant sa stratégie de détection des interactions protéine-protéine, basée sur la complémentarité de fragments protéique -Protein Fragment complementation assay, PCA- ( voir BE 180) vient de co-signer un autre article dans Nature Biotechnologie. Cette fois ci, le professeur Michnick et ses collaborateurs décrivent leur nouvelle stratégie utilisant l'enzyme TEM-1 B-lactamase.
Cette stratégie comprend des essais de colorimétrie in vitro utilisant la céphalosporine et des essais sur cellules intactes avec le substrat fluorescent du CCF2AM.
Les interactions constitutives entre la protéine leucine zipper GCN4 et les protéines apoptotiques Bcl2 (anti-apoptotiques) et Bad (pro-apoptotiques) ainsi que l'homodimérisation de Smad3 ont été testées par des essais in vivo sur un lysat de cellules.
Avec les mêmes tests in vitro les chercheurs ont pu démontrer les interactions entre la protéine kinase B (PKB) et son substrat Bad.
Les essais in vitro sont simples et le rapport signal sur bruit est de l'ordre de 10 pour 1 à 250 pour 1 ce qui est supérieur aux autres PCA développé jusqu'à présent.
De plus les chercheurs ont pu démontrer que ces essais in vitro pouvaient être utiliser pour des analyses quantitatives des interactions entre les petites molécules et les protéines comme la rapamycine/ FKBP et les FRB.
La combinaison des essais de colorimétrie in vitro et de fluorescence in vivo de la B-lactamase dans les cellules animales suggèrent une grande variété d'applications sensibles et à haut débit incluant un ensemble d'analyse in vitro d'interactions protéine-protéine ou enzyme-protéine et des applications in-vivo telles que la sélection clonale de cellules exprimant des protéines cibles.
Si vous désirez plus de détails concernant ces essais utilisés dans l'article de Nature Biotechnology vous pouvez consulter les références suivantes : Remy, I. and Michnick, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.96, pp.
5394-5399 (1999) et vol. 98, pp. ...

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Article écrit le 2002-06-24 par
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Mots clés: strategie detection interactions proteine-proteine in vivo vitro


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